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GZBIO
权威信息 ● 对接服务 2015年3月 第二期
导 读

生物服务是广州特色产业领域,集聚了众多知名生物服务品牌企业和研究机构,拥有优势专有技术对外提供单项或整合化服务。为更好地宣传广州生物服务品牌,加强各方交流和对接,具有权威公信力的 广州生物医药公共服务平台和专注生物服务供需对接的 集采园联合举办 广州生物服务知名品牌系列推广活动,通过网络开设专栏及组织宣传活动向华南地区乃至全国用户展示生物服务知名品牌形象,并对生物服务企业所提供的服务进行详细展示和大力推广。本期将对广州复能基因有限公司的科研服务进行专题推介。

公 司 简 介

广州复能基因有限公司于2000年成立,由美国GeneCopoeia公司和中国投资者合资组建。公司主要生产和销售与基因组学和蛋白质组学相关的、高质量的生物研究试剂和产品,包括核酸、蛋白质和抗体相关的试剂、产品和服务。公司拥有多项美国专利,是全球最大的、NCBI推荐的克隆供应商。

公司拥有3000平方米标准实验室和优秀科研团队,经过不懈努力和创新,产品和服务已销售到全球5大洲。

推 介 服 务
表达克隆构建服务
保证序列!庞大人、鼠基因库,150多种载体任选。
荧光定量PCR(qRT-PCR)
自主研发的逆转录和qPCR试剂,引物经实验确证,实验结果均一性好,效果更佳!
慢病毒包装服务
ORF, miRNA, shRNA,promoter, sgRNA 慢病毒包装。
基因组编辑技术服务
基于CRISPR/Cas9, TALEN 两大技术的基因敲除、敲入、突变等。
miRNA完整解决方案
pre-miRNA, miRNA inhibitor, 3‘UTR表达克隆,靶标验证
   
专 题 报 道

随着生物研究领域的不断向前发展,基础研究相关试剂和服务亦需不断创新和更替以迎合生物产业发展的需求。广州复能基因不断创新,在克隆构建平台的基础上开发出了一整套高品质的荧光定量PCR试剂、慢病毒包装技术等。

1、构建表达克隆

表达克隆的构建就是将目的基因的开放阅读框(ORF)装载到带有特定蛋白标签的表达载体上。表达克隆可直接被用于体内体外不同宿主或表达系统的蛋白表达和 功能研究。目前,复能基因提供45000多个人/小鼠基因、6种表达体系、150多种载体、50多种蛋白标签和标签组合,并提供克隆定制服务,以满足客户 几乎任意实验需求。

50多种标签任选!标签举例:

应用

  • 在不同表达体系中表达重组蛋白
  • 用反向转染技术在哺乳动物细胞中表达蛋白和细胞定位
  • 表达有特异标记的蛋白,用于分离,纯化和固相化及下游功能研究和分析

2、慢病毒

慢病毒系统可高效地把基因转染到活体模式动物和几乎所有的哺乳动物细胞中。慢病毒的转导效率接近100%,是理想的表达载体系统。
复能基因(GeneCopoeia)公司提供慢病毒包装服务以及慢病毒包装相关的所有试剂产品。

  • 慢病毒包装服务

GeneCopoeia(复能基因)提供基于第三代慢病毒包装体系的相关试剂产品与服务。慢病毒包装包含:过表达ORF, miRNA, shRNA, promoter, sgRNA 等等。滴度不低于108 TU/mL,均为纯化级病毒。

图1. GeneCopoeia 包装的慢病毒颗粒转导24孔板中H1299细胞,MOI=1. 左:LPP-MCHR-Lv105(红色荧光), 曝光时间为1s. 右: LPP-eGFP-Lv105 (绿色荧光), 曝光时间为 0.6s. 图2. GeneCopoeia以LPP-NEG-Lv201载体包装成慢病毒,转导24孔板中NIH/3T3细胞,不同转染复数(MOI)对应的效果。
图3. GeneCopoeia慢病毒颗粒转导H1299细胞。 表达eGFP的慢病毒克隆转染工具细胞,产生的慢病毒(LPP-Y4459-Lv122)直接转导24孔板中的H1299细胞。转导后72小时进行荧光显微观察。
ID of Y4459:FMNL3
FMNL3编码区长度:3084 bp
FMNL3-eGFP融合长度:>3.8 kb

3、qPCR

qPCR的工作原理:在反应体系中加入荧光分子,通过荧光信号的按比例增加来反映DNA量的增加,使PCR产物的实时检测成为可能。
应用:miRNA 或 mRNA的定量,SNP分析,生物物种鉴定,病毒病原菌定量分析,siRNA效果分析...

  • 荧光定量PCR

miRNA / mRNA 荧光定量PCR检测系统是 GeneCopoeia 推出的专门应用于miRNA或mRNA 定量检测的体系。 All-in-One™ miRNA qRT-PCR Detection Kit 在miRNA定量检测方面性能卓越,是备受miRNA研究者们青睐的 明星产品。

图1. 利用All-in-OneTM miRNA qRT-PCR Detection Kit对miRNA进行定量的实验原理。
图2. 以不同量(5μg、1μg、200ng、20ng、2ng、100pg)的人脑总RNA为模板,利用All-in-One™ miRNA qPCR Detection Kit来检测hsa-miR-124的表达量。左图:扩增曲线;右图:标准曲线。结果显示,模板在5μg~100pg的总RNA范围内得到了良好的线性扩 增。

4、基因组编辑— TALEN & CRISPR

TALEN

TALEs源自植物病原菌黄单胞菌(Xanthomonas),当感染植物时,病原菌分泌的TALEs识别宿主植物靶基因的启动子区,调控相应基因的表达。 TALENs已用在人胚胎干细胞(ES)和诱导多功能干细胞(IPSCs)的基因修饰稳定株的制备,还用于大鼠,线虫,斑马鱼等基因敲出动物模型的构建。

TALEN工作原理

CRISPR

CRISPR-Cas系统(The clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats-associated protein systems)是一个细菌及古细菌进化出来用以抵御病毒和质粒入侵的适应性机制。

在II型CRISPR系统中,CRISPR RNA(crRNA)与转录激活crRNA(Trans-activating crRNA, tracrRNA)退火形成的复合物能特异识别基因组序列,引导Cas9核酸内切酶在目的片段生成DNA双链断裂(double-strand breaks, DSBs)。 这个识别复合体可以通过融合crRNA与tracrRNA序列形成sgRNA(single-guided RNA)进行简化。基因组的靶序列中有长约20bp的片段与crRNA或sgRNA互补配对;靶序列末端的三核苷酸区域PAM(5’-NGG-3’)为 Cas9识别位点,是实现剪切功能的关键。

CRISPR工作原理
应用:基因标记、突变、敲除、表达激活、表达抑制

利用经典克隆方法将目的基因和meGFP基因序列装载到pDonor-D09载体上,通过同源重组原理,带有同源重组臂的D09与CRISPR/ Cas9技术切割形成的双链断裂位点相互作用,转染HEK293T细胞后,成功获得2个阳性单克隆细胞系。
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