名称:   一种利用类弹性蛋白标签纯化重组乳糖酶的方法 
申请（专利）号:    CN201010244640.9  申请日:    2010.08.03 
授权（公告）号:    CN101955960B  授权（公告）日:    2012.05.23 
 申请（专利权）人:    中山大学 
地址:    510275 广东省广州市海珠区新港西路135号 
发明（设计）人:    刘玉焕;李刚;余世琴 
 
         摘要: 
 
本发明公开一种利用类弹性蛋白标签纯化重组乳糖酶的方法，包括以下步骤：(1)将乳糖酶基因tt412和类弹性蛋白标签ELP[V5-80]依次连接到原核表达载体pET-32a(+)上，构建成乳糖酶融合表达载体pET32a-tt412-ELP[V5-80]；(2)构建好的表达载体电击转化大肠杆菌表达菌株BLR(DE3)，然后将鉴定过的阳性转化子进行自诱导表达50-80小时；(3)收集菌体，用超声波破碎，离心去除不溶性物质，得到乳糖酶粗酶液，置于4℃冰箱备用；(4)确定乳糖酶粗酶液沉淀的相变温度；(5)用ITC方法纯化乳糖酶重组蛋白。本发明方法简单、快速、高效，可用于大规模地分离纯化乳糖酶和其它工业酶制剂，在酶制剂生产中具有较高的实际应用价值。       
 
主权项: 
 
一种利用类弹性蛋白标签纯化重组乳糖酶的方法，其特征是包括以下步骤：(1)将乳糖酶基因、SF1片段和类弹性蛋白标签ELP[V5‑80]依次连接到原核表达载体pET‑32a(+)上，构建成乳糖酶融合表达载体pET32a‑乳糖酶基因‑ELP[V5‑80]，所述的乳糖酶基因为tt412；该基因为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，SFI片段的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；(2)构建好的表达载体电击转化大肠杆菌表达菌株，然后鉴定过的阳性转化子进行自诱导表达50‑80小时；(3)收集菌体，用超声波破碎，离心去除不溶性物质，得到可溶性细胞裂解液即粗酶液，置于4℃冰箱备用；(4)确定乳糖酶粗酶液沉淀的相变温度；(5)用ITC循环方法纯化乳糖酶重组蛋白。