名称:      一种从胶基中提取动植物基因组DNA的方法

申请（专利）号:       CN201210041411.6     申请日:       2012.02.22

授权（公告）号:       CN102533735B     授权（公告）日:       2013.09.04

申请（专利权）人:       广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心

地址:       510623 广东省广州市珠江新城花城大道66号B1213房

发明（设计）人:       刘津;李志勇;李丹宁;张隽;陈源树


摘要:

本发明提供了一种从胶基或含胶基食品中提取动植物基因组DNA的方法，包括以下步骤：(1)样品前处理；(2)样品中胶基成分的溶解：将经前处理的胶基或含胶基食品，以三氯甲烷充分溶解至饱和；(3)溶解后胶基中极性成分的萃取：以CTAB提取液作为萃取剂，萃取溶解后胶基中极性成分。本方法操作简便，且能够有效从胶基或含胶基食品中提取动植物基因组DNA，以便用于PCR或相应下游实验，进行进一步的检测。     
主权项:

一种从胶基中提取动植物基因组DNA的方法，包括以下步骤：（A）样品前处理：将胶基或含胶基食品样品剪碎；（B）样品中胶基成分的溶解：用三氯甲烷溶解经步骤（A）前处理后的样品，至饱和；（C）胶基中极性成分的萃取：以CTAB提取液作为萃取剂，萃取经步骤（B）溶解后的胶基中的极性成分；（D）提取样品中的DNA；其中，所述样品和三氯甲烷、CTAB提取液的用量比例为：在步骤（A）中，所述样品用量为10克；在步骤（B）中，用于溶解样品的三氯甲烷用量为15～20ml；所述步骤（C）中，用于萃取的CTAB提取液的体积为15～20 ml；所述步骤（C）中，加入15～20 ml CTAB提取液至经步骤（B）溶解后的胶基中，充分震荡混匀，940×g室温离心5分钟，取上层转移至另一50 ml离心管；再次重复该操作；所述步骤（D）中，提取样品中DNA的具体步骤如下：（a）取离心后的上层清液，65℃水浴15分钟，加入RNA酶，37℃水浴15分钟；（b）加入等体积酚/氯仿/异戊醇混合液，该混合液中酚、氯仿、异戊醇的体积比为25:24:1，混合液的pH值≥7.5，振荡混匀后11000×g室温离心10分钟，小心取出上层清液，移至另一离心管，离心后，两相界面浑浊，加入等体积的上述酚/氯仿/异戊醇混合液至上层清液中，震荡混匀后，11000×g室温离心10分钟；（c）加入核酸共沉淀剂混匀后，按所得混合液1/10体积加入3M NaAc并混匀，加入等体积异丙醇，充分混匀，－20℃静置30～40分钟，28000×g 4℃离心10分钟，弃上清；（d）向沉淀中加入600μl －20℃预冷的75%乙醇，快速混匀，28000×g 4℃离心5分钟，弃上清；（e）将所得沉淀干燥15分钟，然后溶解沉淀。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（e）中用50μl双蒸水溶解沉淀。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（e）中用50μl TE缓冲液溶解沉淀。