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用于修复神经损伤的水凝胶包裹慢病毒Lingo-1 RNAi复合物及其制备方法
名称: 用于修复神经损伤的水凝胶包裹慢病毒Lingo-1 RNAi复合物及其制备方法
申请(专利)号: CN201210033970.2 申请日: 2012.02.15
授权(公告)号: CN102657874B 授权(公告)日: 2013.12.04
申请(专利权)人: 中山大学
地址: 510275 广东省广州市新港西路135号
发明(设计)人: 邓宇斌;吴洪福;万勇
摘要:
本发明公开一种用于修复神经损伤的水凝胶包裹慢病毒Lingo-1 RNAi复合物,采用Lingo-1 RNAi联合水凝胶生物支架及释放的策略,RNAi干扰Lingo-1协同水凝胶促进脊髓损伤轴突再生,为脊髓损伤修复提供了新的治疗途径。本发明还公开了所述水凝胶包裹慢病毒Lingo-1 RNAi复合物的制备方法,所述方法操作方便,易于实现。同时,本发明又公开了所述水凝胶包裹慢病毒Lingo-1RNAi复合物在制备治疗脊髓损伤的药物中的应用。
主权项:
一种用于修复神经损伤的水凝胶包裹慢病毒Lingo‑1RNAi复合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)慢病毒Lingo‑1RNAi的构建;(2)水凝胶的制备:将水凝胶与去离子水在无菌条件下配制成质量比为20%~25%的混悬液,将混悬液置于2‑8℃至水凝胶充分溶解,过滤除菌,得水凝胶原液;(3)将步骤(1)构建的慢病毒Lingo‑1RNAi与步骤(2)制备的水凝胶原液在2~8℃以每毫升水凝胶原液中含1×107TU的慢病毒Lingo‑1RNAi的浓度混合,搅拌使其充分混合,得混合液;(4)取步骤(3)得到的混合液以200μL每孔加至24孔板,使其平铺孔底,放置于25℃~37℃培养箱温育3‑5min,取出后,孔底形成不透明薄胶状物,即得水凝胶包裹慢病毒Lingo‑1RNAi复合物;所述RNAi的核苷酸序列为:UCGAGAAAAAAAAGCACAACAUCGAAAUUGAAUCUCUUGAAUUCAAUUUCGAUGUUGUGCUUA;所述水凝胶为PluronicF‑127水凝胶。