名称:      狂犬病灭活抗原及其制备方法

申请（专利）号:       CN201110091489.4     申请日:       2011.04.12

授权（公告）号:       CN102205119B     授权（公告）日:       2012.05.3

申请（专利权）人:       广州市华南农大生物药品有限公司

地址:       511300 广东省广州市增城增江街东区高科技工业基地

发明（设计）人:       薛素强;郭霄峰;梁昭平;孙招金;王斌;李敏


摘要:

本发明公开一种狂犬病灭活抗原，是由滴度为5.0×106-1.0×107FFU/mL的狂犬病病毒dG株病毒液和浓度为5.0×105-1.0×106个/mL的BHK-21细胞悬液混合，在33-37℃环境中培养72-96小时，冻融、离心分离收集上清液，调整上清液pH至7.4-7.6，按终体积比浓度为0.025％-0.05％逐滴加入β-丙内酯，经灭活、水解制成的。本发明的有益效果是：无需浓缩，简化生产工艺，节约生产成本；配制的狂犬病灭活疫苗可诱导犬产生高水平抗体，并能有效保护犬对狂犬病病毒强毒的攻击。本发明方法制备的狂犬病灭活抗原无需浓缩、纯化，大大减化了生产工艺，降低生产成本，适合在中国推广应用。     

主权项:

狂犬病灭活抗原，其特征在于，由滴度为5.0×106~1.0×107FFU/mL的狂犬病病毒dG株病毒液和浓度为5.0×105~1.0×106个/mL的BHK‑21细胞悬液混合，在33~37℃环境中培养72~96小时，冻融、离心分离收集上清液，调整上清液pH至7.4~7.6，按终体积比浓度为0.025%~0.05%逐滴加入β‑丙内酯，再经灭活、水解制成的。2、如权利要求1所述的狂犬病灭活抗原，其特征在于：培养后的混合液的病毒滴度1.0×108~1.0×1010FFU/mL。   3、狂犬病灭活抗原制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：    （1）将狂犬病病毒dG株病毒液的滴度调整为5.0×106~1.0×107FFU/mL，将BHK‑21细胞悬液的浓度调整为5.0×105~1.0×106个/mL，取BHK‑21细胞悬液与调整后的病毒液悬液混合，其中病毒悬液的体积占总培养体积的10%~20%，将所述病毒液与BHK‑21细胞悬液的混合液按转瓶总体积的10%接种于转瓶中，调整转瓶速度为8~12转/小时，在33~37℃环境中培养；（2）培养72~96小时后，将转瓶内的培养液在‑50℃~‑15℃下反复冻融3~5次，5000~8000转/分钟 2~4℃离心30~50分钟，去除沉淀的细胞碎片，收集上清液，用重量百分比浓度为7.4~7.6%的NaHCO3在4℃环境中调整所述上清液的pH至7.4~7.6； （3）将收获的上述上清液按终体积比浓度为0.025%~0.05%逐滴加入β‑丙内酯，在3~4℃灭活24小时；将灭活的上清液再经37℃水解2~3小时。4、如权利要求3所述的狂犬病灭活抗原制备方法，其特征在于：所述转瓶放置于细胞培养转机内，所述细胞培养转机为青岛依爱通信设备有限公司生产的型号为ZP1‑2‑45的细胞培养转机。5、如权利要求3所述的狂犬病灭活抗原制备方法，其特征在于：所述BHK‑21细胞为第115代的BHK‑21细胞。