名称:      一种诱导大豆下胚轴外植体的不定芽再生的方法

申请（专利）号:       CN201210207072.4     申请日:       2012.06.21

授权（公告）号:       CN102754597B     授权（公告）日:       2013.12.04

申请（专利权）人:       华南农业大学

地址:       510642 广东省广州市天河区五山路483号

发明（设计）人:       杨跃生;刘颖;于磊;张奇;郭振飞;年海


摘要:

本发明属于植物生物技术领域。在以大豆下胚轴作为外植体诱导不定芽再生时，一般是在大豆种子萌发培养基或/和下胚轴外植体不定芽再生培养基中添加细胞分裂素，在这种条件下胚轴外植体的不定芽再生效率很低，芽体的质量也较差。本发明，在种子萌发培养基和不定芽再生培养基中都不添加BA，在取得外植体后，配制显著高浓度的BA溶液对大豆下胚轴外植体形态学上端切口附近进行短期浸泡处理，给予该部位具有分化能力的细胞较强的不定芽分化刺激作用，因此，也就可以获得数量较多和质量较好的不定芽。应用本发明可以极显著地提高大豆下胚轴外植体不定芽再生的效率和质量，使下胚轴成为大豆遗传转化的理想受体。     

主权项:

一种诱导大豆下胚轴外植体的不定芽再生的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）将大豆幼苗在MSB5培养基上培养后，进行切割获取下胚轴外植体；（2）对下胚轴外植体的形态学上端部分用苄基腺嘌呤溶液浸泡处理；（3）将步骤（2）处理后的下胚轴外植体接种至MSB5培养基上培养;步骤（1）和步骤（3）所述MSB5培养基中苄基腺嘌呤的浓度为0；步骤（2）的浸泡处理时间为20‑40 min；步骤（2）的苄基腺嘌呤溶液浓度为30mg/L；在于步骤（1）和步骤（3）的MSB5培养基中含有：MS培养基配方的无机成分、B5培养基配方的有机成分、25 g/L蔗糖、100 mg/L肌醇、300 mg/L蛋白胨、7 g/L琼脂，pH为5.8‑6.0。