名称:      稻瘟病抗性基因Pik-s功能特异性分子标记及其方法与应用

申请（专利）号:       CN201210118460.5     申请日:       2012.04.20

授权（公告）号:       CN102653760B     授权（公告）日:       2013.12.25

申请（专利权）人:       华南农业大学

地址:       510642 广东省广州市天河区五山路483号

发明（设计）人:       潘庆华;陈彩霞;翟纯;林菲;王玲


摘要:

本发明公开一种稻瘟病抗性基因Pik-s功能特异性分子标记及其方法与应用。该分子标记由Piks-1FNP、Piks-2FNP和Piks-3FNP组成，分别由引物对SEQID NO.1和SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4以及SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6从水稻总DNA中扩增出来的核苷酸序列。本发明通过对多个水稻稻瘟病抗性基因Pik-s的等位基因序列与Piks-1及Piks-2序列做比对的方法，分析得到能区别于其感病等位基因以及其他稻瘟病抗性基因的Pik-s功能特异性的3个单碱基差异，再通过设计，得到前述引物，对水稻DNA扩增，分别得到Pik-s功能特异性分子标记Piks-1FNP、Piks-2FNP和Piks-3FNP。本发明可在大量的水稻种质资源中筛选、鉴定该功能性抗性基因，以及在分子标记辅助选择育种、基因聚合育种以及转基因育种中的得到应用。     

主权项:

一种稻瘟病抗性基因Pik‑s功能特异性分子标记PiksFNP，其特征在于：它由Piks‑1FNP、Piks‑2FNP和Piks‑3FNP组合而成；分别通过引物对SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2， SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4，以及SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO. 6，分别从水稻总DNA中扩增出来核苷酸序列Piks‑1FNP、Piks‑2FNP和Piks‑3FNP，并经特异性酶切之后，与稻瘟病抗性基因Pik‑s呈特异性带型的分子标记；所述引物对SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2，SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4，以及SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO. 6的核苷酸序列如下所示：SEQ ID NO. 1： 5’‑GTCCTACGACCTGGATGATG‑3’；SEQ ID NO. 2： 5’‑CAGAGAAGCGATTGGAGGCA‑3’；SEQ ID NO. 3： 5’‑TAGACGAGCAAGTCCCTGA‑3’；SEQ ID NO. 4： 5’‑GCAAAGTTTACTCCAATCGC‑3’；SEQ ID NO. 5： 5’‑TTTCTGGAGGTCAGCCGAT‑3’；SEQ ID NO. 6： 5’‑CAACCGTTGTTTTGCCTCC‑3’；所述的水稻为水稻品种Shin 2；所述的特异性酶切指的是由引物对SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 2扩增得到的PCR产物通过限制性内切酶SphI酶切；由引物对SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 4扩增得到的PCR产物通过限制性内切酶NcoI酶切；由引物对SEQ ID NO: 5和SEQ ID NO: 6扩增得到的PCR产物通过限制性内切酶SpeI酶切；所述的Piks‑1FNP的大小为124 bp，酶切后的大小为103 bp；所述的Piks‑2FNP的大小为145 bp，酶切后的大小为64 bp和81 bp；所述的Piks‑3FNP的大小为139 bp，酶切后的大小为119 bp。