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一种石斑鱼虹彩病毒(SGIV)灭活疫苗的转瓶生产方法
名称: 一种石斑鱼虹彩病毒(SGIV)灭活疫苗的转瓶生产方法
申请(专利)号: CN201210240292.7 申请日: 2012.07.11
授权(公告)号: CN102727879B 授权(公告)日: 2013.12.25
申请(专利权)人: 中国科学院南海海洋研究所
地址: 510301 广东省广州市新港西路164号
发明(设计)人: 秦启伟;欧阳征亮;魏京广;黄晓红
摘要:
本发明公开了一种石斑鱼虹彩病毒(SGIV)灭活疫苗的转瓶生产方法。它包括细胞的转瓶培养、病毒的扩增和收获和病毒灭活。应用本发明的石斑鱼虹彩病毒(SGIV)灭活疫苗的转瓶生产方法可以大规模的生产石斑鱼虹彩病毒(SGIV)灭活疫苗,由于是工业流程化生产,其生产成本低、劳动强度小,生产出来的石斑鱼虹彩病毒(SGIV)灭活疫苗经过疫苗检验,从细胞水平和鱼体水平证明该石斑鱼虹彩病毒灭活疫苗是安全的,疫苗效力检测证明,本发明的石斑鱼虹彩病毒(SGIV)灭活疫苗的相对保护率为87.0%~95.7%,说明此石斑鱼虹彩病毒(SGIV)灭活疫苗对受免石斑鱼提供了显著的保护,具有良好的免疫保护效力,且批间质量稳定。
主权项:
一种石斑鱼虹彩病毒(SGIV)灭活疫苗的转瓶生产方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)细胞的转瓶培养:将石斑鱼脾组织细胞接入转瓶中,加入细胞生长液,充分摇匀后置于转瓶机上培养,培养温度为28℃,转速为16~20转/小时,所述的细胞生长液为:含体积分数8~10%的胎牛血清、质量分数0.266%NaCl和5mM HEPES的L15培养基;(2)病毒的扩增和收获:转瓶培养石斑鱼脾组织细胞直至长满单层,接种0.01MOI的石斑鱼虹彩病毒于对数生长期的石斑鱼脾组织细胞中,于28℃培养,转瓶机转速设置为16~20转/小时,培养2~3小时以吸附病毒,随后将转瓶机转速设为3~5转/小时,以扩增病毒,观察病毒病变效应,直至细胞病变完全,然后反复冻融2~3次;(3)将冻融后的病毒液中的病毒灭活后获得石斑鱼虹彩病毒灭活疫苗。