名称:      一种利用胡萝卜愈伤组织繁殖和培养保存针线虫的方法

申请（专利）号:       CN201210531519.3     申请日:       2012.12.10

授权（公告）号:       CN103004592B     授权（公告）日:       2013.12.25

申请（专利权）人:       华南农业大学

地址:       510642 广东省广州市天河区五山路483号

发明（设计）人:       谢辉;王珂;徐春玲;李宇


摘要:

本发明公开了一种利用胡萝卜愈伤组织繁殖和培养保存针线虫的方法，属于植物寄生线虫培养领域。该方法包括如下步骤：（1）无菌条件下将胡萝卜用酒精浸泡后灼烧，去表皮后切成薄片放入灭菌培养皿中，封口，放入培养箱培养至胡萝卜片长出愈伤组织；（2）将针线虫用硫酸链霉素溶液消毒后，离心收集，用无菌水洗涤，再离心收集，最后用无菌水制备针线虫悬浮液，将悬浮液滴在胡萝卜愈伤组织上；（3）将接种了针线虫的胡萝卜愈伤组织放入培养箱培养。本发明的方法不需要使用培养基培养，操作简便，使用硫酸链霉素溶液消毒不影响针线虫的活性，实现了简单、高效、大量繁殖针线虫的目的，同时还能长期保存针线虫并保持针线虫对植物的寄生性和致病性。     

主权项:

一种利用胡萝卜愈伤组织繁殖和培养保存针线虫的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）制备胡萝卜愈伤组织：无菌条件下将干净的胡萝卜用酒精浸泡后灼烧，再将胡萝卜去表皮后切成薄片放入灭菌培养皿中，封口，放入培养箱培养至长出胡萝卜愈伤组织；（2）针线虫的消毒和接种：将针线虫用硫酸链霉素溶液消毒后，离心收集针线虫，用无菌水洗涤针线虫，再离心收集针线虫，最后用无菌水制备针线虫悬浮液，将针线虫悬浮液滴在胡萝卜愈伤组织上；（3）针线虫的繁殖和培养保存：将接种了针线虫的胡萝卜愈伤组织放入培养箱培养；步骤（2）中所述的针线虫的消毒为使用0.2～0.3wt%硫酸链霉素溶液表面消毒6～12h；步骤（2）中所述的离心的条件为4500～5000rpm离心2～5min；步骤（3）中所述的繁殖的条件为将接种了针线虫的胡萝卜愈伤组织放入培养箱23～27℃黑暗培养8～10周；步骤（3）中所述的培养保存的条件为将接种了针线虫的胡萝卜愈伤组织放入培养箱22～25℃黑暗培养保存16周以上。