血清学诊断方法的简便、快速、易行及在其它传染病诊断中所取得的重大成就,人们一直都在努力寻找敏感、特异的检测靶标以提高结核病血清学诊断水平。目前已有许多结核菌菌体抗原应用于结核病血清学诊断,但效果不佳。迄今的研究证实:在结核菌生长的早、中期会向体外释放一组分泌蛋白质。那么,结核菌在侵入人体到感染巨噬细胞过程中也会分泌此类蛋白质且暴露于机体免疫系统,并启动机体体液免疫。我们可否从中寻找到血清学诊断抗原?目前鲜见研究报道。
依据上述思路,本项目拟进行以下研究:对结核杆菌7H9的早中期培养滤液平行进行6次双向凝胶电泳(2-DE),同时获得6块凝胶;其中1块银染作平行胶,其余5块凝胶经电转膜将其蛋白质转至硝酸纤维素膜上,然后分别与结核患者及正常健康人血清进行Western 印迹分析,比较二者Western 印迹反应图谱,并对照平行胶找出相应的差异反应蛋白质点;最后以找到的差异蛋白质为抗原检测结核患者及正常健康人血清中相应抗体,从中筛选敏感度高、特异性好的结核病血清学诊断抗原。
项目完成后,预计可以在结核菌分泌蛋白中找到几种目标抗原,继之研发敏感度高、特异性好的新型结核病血清学诊断试剂,最终实现对结核病的早期、快速诊断。
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