树突状细胞(DC)是人体最重要的抗原递呈细胞,BA46和HER2是乳腺癌的特异抗原,而腺相关病毒(AAV)是目前人类基因治疗中最有希望应用于临床的载体之一。本课题进行两方面研究:① 以AVV为载体,将BA46和HER2的基因转染DC,诱导特异的细胞毒性淋巴细胞(CTL),研究其免疫功能情况;② 以乳腺癌细胞株Hs578T构建荷瘤祼鼠模型,以所制备的CTL免疫荷瘤祼鼠,研究移植瘤变化情况,通过以上两方面的研究,为申请此免疫基因细胞疗法的临床试验奠定基础。
关键技术:① 构建AAV/BA46, AAV/HER2,表达质粒,并以pSH3包装系统制备高滴度的病毒。(2)以抗原基因转染的方法从外周血单个核细胞制备成熟DC,并诱导CTL,并在体外及动物试验检测CTL的免疫功能,初步摸索出可用于临床试用的基因转染DC,诱导CTL的新方法。
特色和创新:本研究在国内首次以AAV为载体,以无腺病毒参与的pSH3 包装系统制备高滴度的腺相关病毒,并采用基因转染代替外源蛋白冲击的方法制备DC,并诱导CTL,进行治疗乳腺癌的研究,在国际上亦属领先。 |