本项目的研究内容是以小环DNA为载体,采用内皮细胞抑制素(ES)及其功能域基因片段 (6-49 AA,E1)对恶性肿瘤进行抗血管生成基因治疗,探索以一种全新非病毒载体--小环DNA的基因治疗在肿瘤治疗中的应用,利用内皮细胞抑制素蛋白具有血管生成抑制活性的功能域,在肿瘤的抗血管生成疗法中提供新的高效侯选药物。
其创新点体现在:与传统的质粒载体相比较,研究小环DNA所携带的外源基因在内皮细胞和肿瘤细胞内表达更具有高效性与持续性,动物体内低免疫原性及无免疫原性,对以小环DNA为载体进行基因治疗具有更高的安全性和有效性;在抑制内皮细胞增殖与迁移的体外实验中显示出比全长蛋白更高的活性,而且它的稳定性和可溶性均优于全长蛋白。
本项目关键技术体现在:一.人脐静脉内皮细胞HUVEC培养方法;二.小环DNA介导外源基因表达情况的检测方法的建立。三.重组小环DNA载体的制备与纯化方法的建立。 |