主要研究内容:克隆鸡RNA Pol I的启动子序列和具有抗禽流感病毒作用的鼠Mx1蛋白编码序列,构建重组慢病毒表达载体,体外转染培养的3T3细胞,观察转染的细胞抗禽流感病毒的效果;在此基础上,收集鸡的精子细胞,转基因后进行人工受精,孵育受精卵,观察Mx1基因在仔鸡基因组中的插入、表达以及抗禽流感病毒的效果,并观察所转基因的安全性;目标是培育出抗禽流感的转基因鸡。
关键技术:目前鸡的人工授精一般采用新鲜的精子,而本研究需在体外进行转基因的操作,该过程会否影响精子的活力,进而影响受精的效果,以及外源基因整合到鸡基因组中的效率、表达的效果,是本项目需要解决的关键技术问题,即:一套行之有效的鸡转基因体系。
特色与创新:鸡是禽流感和人禽流感之间的重要桥梁,培育能抗禽流感的转基因鸡对于禽流感和人禽流感的防治无疑是一种长治久安的尝试,目前国内外该方面的研究都才起步,本项目立题新颖,特色鲜明。在转基因方法上,本研究将精子载体法和逆转录病毒载体法有机地结合在一起,既发挥了精子载体法简便易行、对卵原核无损伤的优点,又兼顾了逆转录病毒载体整合效率高的特点,对关键技术问题的解决至关重要。另外,本研究将抗禽流感病毒效应分子Mx1置于RNA聚合酶启动子的驱动下,禽流感(RNA)病毒感染复制时,就会激发Mx1的表达并发挥其抗RNA病毒的作用,构思巧妙,创新性强。 |