生物医药技术
研究动向:热稳定α-半乳糖苷酶的高效表达和发酵工艺过程统计优化
| 研究时间： | 2006 |
| 研究单位： | 广州市微生物研究所 |
| 研究者： | 杨冠东 |
| 研究领域: | |
| 医药生物技术 | |
| 内容简介: | |
| 本项目针对α-半乳糖苷酶在食品、饲料、医药工业等领域应用的过程中存在的酶单位产量较低、胞内提取困难、生产成本居高不下、酶学性质欠佳等关键问题，利用生物技术开发一条热稳定α-半乳糖苷酶高效生产途径。 该项目是在克隆本实验室保存的耐热分枝梨头霉的热稳定α-半乳糖苷酶基因基础上，利用易错PCR和DNAshuffing相结合的分子定向进化方法，筛选高酶活热稳定突变体；通过真核表达载体在毕赤酵母中高效表达，获得具有热稳定的α-半乳糖苷酶；进一步对该工程菌株的发酵条件进行统计优化，利用Plackett-Burman设计基于不完全平衡块原理，从众多的考察因子中快速有效地筛选出最为重要的因子；用最陡爬坡法寻找实验的最优空间，使实验值能充分接近最大响应面区域；通过中心组合设计(Central Composite Design)，对影响生物过程的主因子及其交互作用进行评价，从而获得最优化条件。在摇瓶培养条件优化的基础上，再进行10升和50升发酵中试，酶制剂的提取、纯化。 本项目首次克隆耐热分枝梨头霉的热稳定α-半乳糖苷酶基因，具有自主知识产权。通过先进的发酵统计优化方法获得热稳定α-半乳糖苷酶的高效表达，为其产业化奠定了基础。 | |
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