在已经克隆猪瘟病毒保护性抗原基因、构建完成植物中间表达载体、建立甜玉米高频再生系统和根癌农杆菌介导甜玉米基因转化方法的情况下,利用在玉米糊粉层和种胚特异表达启动子,完成猪瘟病毒保护性抗原基因密码子优化,构建玉米种子调控基因表达的植物表达载体,通过根癌农杆菌介导的甜玉米基因转化方法,获得转基因株系,筛选遗传和稳定表达的转基因纯系。收获转基因纯系的种子,测定外源基因的表达,开展饲用疫苗的免疫效果研究。该项研究可以提高疫苗的安全性、降低生产成本,显著提高农作物的附加值。
创新性:
1、本项目选用植物组织特异高表达启动子,不仅可以显著提高抗原基因的表达量,相应提高其免疫效价,而且与非特异性启动子相比,可以显著降低由外源基因表达对受体植物的影响。
2、利用玉米种子特异高表达启动子等调控元件,特异性启动外源基因在甜玉米种子的糊粉层和种胚中表达,这不仅显著提高了外源基因的表达量,由于其仅在转基因植物的能量贮藏器官中表达,不仅表达产物稳定性提高,而且对转基因植物本身和环境的影响也降到最低。
3、本疫苗的免疫策略为刚出生的幼猪喂食,此时,其消化系统的消化酶系统还没有完全发育,蛋白质未经过降解直接被吸收,不仅免疫效果明显,而且可以获得终生的免疫。 |