漆酶(EC1.10.3.2)在造纸工业、食品工业和环境保护等领域有着广泛的应用。多种真菌具有产生漆酶的功能。拟经过筛选,获得高活性的漆酶新资源。通过新漆酶的分离纯化和测序,获得该酶N-和C端的蛋白质序列。再设计简并引物,利用RT-PCR和测序,经与已有知识产权保护漆酶基因序列比较,克隆新漆酶基因。通过基因工程技术,构建载有新漆酶基因的分泌型表达载体,并将其导入毕赤酵母,以获得高表达的工程菌株;对工程菌株进行发酵条件优化,以初步建立工程菌的发酵工艺。本研究的关键技术在于新漆酶的分离纯化和构建含强启动子和分泌肽信号的新漆酶基因表达载体。本研究的创新之处:获得高活性的漆酶新资源并进行新漆酶的基因克隆和基因工程,经筛选获得高表达的工程菌株,研究的完成可以获得具有自主知识产权的高新技术产品。本研究具有潜在的应用价值。 |